1 前言 茶葉是一種天然的保健飲料藥物，具有*的香氣，口感以及抗癌，延緩衰老等藥用和 保健功效。飲茶有利于健康，然而茶葉的質(zhì)量安全，特別是茶葉中農(nóng)藥污染的問題，一直影 響著茶葉的健康消費。茶葉基質(zhì)復雜，要檢測的殘余農(nóng)藥種類多，性質(zhì)差異大，直接通過儀 器時不能達到檢驗，需要經(jīng)過精細的樣品前處理過程進行分離富集。因此測定茶葉 中的農(nóng)藥殘留不僅需要高靈敏的痕量檢測技術(shù)，還需要高效快速的樣品前處理技術(shù)。

2 儀器與試劑

2.1 儀器 SPE400 全自動機械臂固相萃取儀；氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀；粉碎機；離心機；氮吹儀

2.2 試劑及耗材 丙酮；正己烷；氯化鈉；無水硫酸鈉；活性炭固相萃取小柱，3ml，填充物 250mg；中性 氧化鋁固相萃取小柱，3ml，填充物 250mg 丙酮-正己烷（1+3）溶液：取 100 mL 丙酮，加入 300 mL 正己烷，搖勻備用； 丙酮-正己烷（2+1）溶液：取 200 mL 丙酮，加入 100 mL 正己烷，搖勻備用。

3 實驗方法

3.1 實驗步驟 SPE-01-2019 07 2

3.1.1 取樣 茶葉樣品經(jīng)過粉碎后通過孔徑為 0.84mm 篩，混勻。

3.1.2 提取 稱取 1g 均勻試樣于 10mL 離心管中，加入 1g 氯化鈉，加入 2mL 蒸餾水，于混勻器 上混勻 30s，放置 30min，再加入 4mL 丙酮和正已烷混合液，在混合器上混勻 2min。在 2500 r/min 下離心 1min，吸取上層正己烷提取液于另一 15mL 刻度試管中。再分別加入 2mL 丙酮 和正己烷混合液重復提取兩次，合并提取液，加入 1g 無水硫酸鈉干燥。將干燥后的提取液完 全轉(zhuǎn)移至樣品管中，后在氮吹儀上 50℃下氮吹至約 1mL，待凈化。 （加入 Nacl 后） （加入蒸餾水后） SPE-01-2019 07 3 （離心前） （離心后） （氮吹前） （氮吹后）

3.1.3 固相萃取儀器設定 過程 試劑名稱 用量 速度 等待時間 空氣助推 次數(shù) 活化 丙酮 1mL 0.5mL/min 0s 1mL 3 正己烷 1mL 0.5mL/min 0s 1mL 3 上樣 1mL 2mL/min 0s 2mL 2 潤洗上樣 正己烷 1mL 60mL/min 0s 2mL 2 洗脫 丙酮+正己烷（2+1） 6mL 3mL/min 5s 2mL 1 SPE-01-2019 07 4 將收集的洗脫液置于 50℃下氮氣流吹至近干。后用正己烷定容于 0.5 mL，供色譜分 析備用。 3.1.4 色譜測定條件 色譜柱：石英毛細管柱，5%苯基甲基聚硅氧烷固定相。30m*0.2mm（內(nèi)徑），膜厚 0.2 5um，或相當者； 色譜柱溫度：70℃保持 2min，以 8℃/min 上升至 180℃，再以 3℃/min 上升至 280℃，保 持 18min； 進樣口溫度：250℃； 色譜-質(zhì)譜接口溫度：220℃； 載氣：氦氣（純度＞99.995%），0.6mL/min； 進樣量：1uL； 進樣方式：無分流進樣，1min 后開閥； 電離方式：EI； 電離能量：70ev； 測定方式：選擇離子監(jiān)測方式； 監(jiān)測離子（m/z）：見下表； 溶劑延遲：15min。 9 種雜環(huán)類農(nóng)藥的監(jiān)測離子 農(nóng)藥 采集時間/min 監(jiān)測離子（m/z） 莠去津 15~20 173,187,200 a）,215 乙烯利核利 20~25 187,198,212 a),285 SPE-01-2019 07 5 腐霉利 25~26.5 96 a),255,283,285 氟菌唑 25~26.5 219,248,278 a),287 抑霉唑 26.5~28.2 173 a),215,240,296 噻嗪酮 28.2~30.5 105 a),172,175,305 丙環(huán)唑 30.5~36 173 a),191,259,261 氯苯嘧啶醇 36~40.5 139 a),219,251,330 噠螨靈 40.5~43 117,147 a),309,364 a)標記離子為定量離子

3.1.5 色譜測定 根據(jù)樣液中莠去津、乙烯菌核利、 腐霉利、氟菌唑、抑霉唑、噻嗪酮、丙環(huán)唑、氯苯 嘧啶醇、噠螨靈的含量情況，選定峰面積相近的標準工作溶液。標準工作溶液和樣液中莠去 津、乙烯菌核利、 腐霉利、氟菌唑、抑霉唑、噻嗪酮、丙環(huán)唑、氯苯嘧啶醇、噠螨靈的響應 值均應在儀器檢測的線性范圍內(nèi)。對標準工作液的樣液等體積參插進樣測定。

3.1.6 質(zhì)譜確證 對標準溶液及樣液進行測定，如果樣液中與標準溶液相同的保留時間有峰出現(xiàn)，則對其 進行質(zhì)譜確證。當待測物全部監(jiān)測離子的相對豐度與標準品一致，且相似度正負 10%之內(nèi)時， 可確證此待測物。在上述氣相色譜-質(zhì)譜條件下，9 種雜環(huán)類農(nóng)藥的保留時間及監(jiān)測離子豐度 比（m/z)見下表。 SPE-01-2019 07 6 9 種雜環(huán)類農(nóng)藥的保留時間和監(jiān)測離子豐度比 農(nóng)藥 保留時間/min 監(jiān)測離子豐度比 莠去津 18.14 173：187：200：215（26:3:100:58） 乙烯利核利 21.09 187：198：212：285（74:89:100:86） 腐霉利 25.46 96：255：283：285（100:8:69:5） 氟菌唑 25.67 219：248：278：287（18:7:100:53） 抑霉唑 27.33 173：215：240：296（76:100:9:6） 噻嗪酮 28.30 105：172：175：305（100:35:25:6） 丙環(huán)唑 32.20,32.58 173：191：259：261（100:27:88:57） 氯苯嘧啶醇 39.12 139：219：251：330（100:63:54:36） 噠螨靈 41.64 117：147：309：364（15:100:7:6）

4 結(jié)果與討論

4.1 實驗過程為 A/B 串柱類型，經(jīng)過活性炭固相萃取 A 柱的樣品溶液上樣后直接收集，收集 液再過中性氧化鋁固相萃取 B 柱，用潤洗液對收集管潤洗兩次后一起過 B 柱，后將目標物 從 B 柱洗脫。

4.2 活化過程中的 0.5mL/min 的流速為國標中明確要求，上樣和洗脫過程流速應當適當慢一 些，以使目標物盡量保留在柱內(nèi)以及后可以洗脫。

4.3 因活化過程流速很慢，為整個實驗過程的處理速度故此階段空氣助推設置的盡量小。 借助儀器默認空氣助推值溶劑推出。

4.4 結(jié)論 SPE-01-2019 07 7 用固相萃取法凈化茶葉中有機雜環(huán)殘留量的凈化過程實現(xiàn)自動化處理，減少人力的消耗， 實驗過程中使用的有機溶劑采用密封處理，降低了對人體的傷害且儀器能的控制活化、 上樣、洗脫等溶劑流速，使樣品凈化的更為充分。

注意事項 樣品加入蒸餾水混勻后會出現(xiàn)嚴重掛壁情況，之后加丙酮正己烷時需盡量將其沖下，殘 留的可以通過離心將其混勻。離心并干燥后的提取液轉(zhuǎn)移至樣品管后，需用適量正己烷潤洗 離心管，將上層潤洗液一并倒進樣品管后氮吹濃縮。